Western Blot 或蛋白质免疫印迹是一种常规蛋白分析技术。抗体-抗原相互作用的特异性实现了复杂蛋白质混合物中的靶蛋白识别。在这里，EnkiLife为您整理了常用的裂解液配方、常用试剂制备方法、Western Blot 电泳相关试剂、封闭液与凝胶配方、转膜相关缓冲液的详细配方，帮助您顺利完成实验。

一、常用裂解液配方

1. 细胞骨架结合蛋白提取缓冲液--用于提取细胞骨架结合蛋白

Tris, pH 7.4: 10mM

NaCl:  100mM

EDTA: 1mM

EGTA: 1mM

NaF: 1mM

Na₄P₂O₇: 20mM

Na₃VO₄: 2mM

Triton X-100: 1%

甘油: 10%

SDS: 0.1%

脱氧胆酸钠: 0.5%

 

2. 可溶性蛋白缓冲液--用于提取可溶性蛋白

Tris-HCl, pH 7.5: 20mM 

EGTA (Ca²⁺螯合剂):  1 mM

 

3. RIPA裂解液--适用于核膜破碎提取核蛋白

Tris HCl, pH 8: 50mM

NaCl: 150mM

NP-40: 1%

脱氧胆酸钠: 0.5%

SDS: 0.1%

（Tips:含离子型去垢剂脱氧胆酸钠，适用于核膜破碎提取核蛋白。可能使激酶变性并破坏蛋白互作。）

 

4. NP-40裂解液--温和裂解液配方

Tris HCl, pH8: 20mM

NaCl: 137mM

甘油:10%

NP-40: 1%

EDTA: 2mM

 

二、稀释液-溴酚蓝配方

1. 抗体稀释液--用于稀释一抗或二抗

正常血清:100 µl

BSA: 10mg

TBS: 900µl

 

2. 1%溴酚蓝--电泳指示剂

溴酚蓝: 100 mg

ddH₂O: 10 mL

 

三、电泳相关试剂

1. SDS上样缓冲液（2X）--用于SDS-PAGE上样

0.5M Tris-HCl，pH 6.8: 2.5ml

甘油: 2ml

10%SDS: 4ml

0.1%溴酚蓝: 0.5ml

ddH2O: 定容至10mL

 

2. Tris-甘氨酸SDS电泳缓冲液（10X）--SDS-PAGE电泳缓冲液

Tris base: 29g

甘氨酸: 144g

SDS:10g

ddH2O: 定容至1000ml

 

3. MOPS SDS电泳缓冲液（20X）--MOPS缓冲系统电泳液

MOPS: 104.6g

Tris base: 60.6g

SDS: 10g

EDTA: 3g

ddH2O: 定容至500 ml

 

4. MES SDS电泳缓冲液（20X）--MES缓冲系统电泳液

MES: 97.6g

Tris base: 60.6g

SDS: 10g

EDTA: 3g

ddH2O: 定容至500 ml

 

5. Tricine SDS电泳缓冲液（10X）--Tricine缓冲系统电泳液

Tricine: 179g

Tris base: 121g

SDS: 10g

ddH2O: 定容至1000ml

 

四、封闭液与凝胶配方

1. 5%脱脂奶粉封闭液--Western Blot封闭液

脱脂奶粉: 2.5 g

TBST或PBST: 定容至50 ml

 

2. 3%BSA封闭液--Western Blot封闭液

BSA: 1.5 g

TBST或PBST:  定容至50 ml

 

3. 分离胶配方

（Tips:TEMED、APS最后加入，并在倒胶之前充分混匀。）

 

4. 50%丙烯酰胺/Bis--凝胶储存液

丙烯酰胺： 48.3g

Bis： 1.7g

ddH₂O：定容至100 ml

 

5. 分离胶缓冲液

 

6. APS（现配）--凝胶聚合引发剂

APS： 100 mg

ddH₂O：定容至2 ml 

 

7. 4%浓缩胶--SDS-PAGE浓缩胶

（Tips:TEMED、APS最后加入，并在倒胶之前充分混匀。）

 

8. 浓缩胶缓冲液